BD Accuri C6 Plus流式細胞儀是一種可以快速檢測細胞體積、數量、周期和表型的分析技術。使用激光作為發光源,經過聚焦整形后的光束垂直照射在樣品流上。這使得細胞或微粒上的熒光染料被激發,產生散射光和激發熒光。光散射信號在前向小角度進行檢測,這種信號基本上反映了細胞體積的大小。前向散射光(FSC)的強弱與細胞的大小相關,而側向散射光(SSC)的強弱則與細胞內的顆粒多少相關。
熒光信號的接收方向與激光束垂直。經過一系列雙色性反射鏡和帶通濾光片的分離,形成多個不同波長的熒光信號。這些信號用于檢測細胞上的特定標記物,如表面蛋白或DNA含量;主要由流動室和液流系統、光源與光學系統、信號收集與信號轉換系統以及計算機與分析系統四部分組成。具有分選功能的流式細胞儀還包括分選機制;收集到的信號由計算機系統進行分析,可以定量檢測單個細胞的多項指標,從而提供關于細胞群體特性的詳細信息。
BD Accuri C6 Plus流式細胞儀的啟動流程:
1、檢查所有瓶中的液面高度。
2、輕輕推開樣品支架,在上樣針處放上一根裝有至少2ml過濾去離子水的管子。
注意:樣品支架可以安放多種管子,包括任何品牌的12x75mm的管子,以及大多數離心管(不蓋蓋子)。
3、把樣品管上到適當的位置,拉出樣品支架來支撐管子,支架會自動鎖在合適的位置。
注意:樣品管在上樣針頂端并不形成密封。當將上樣針插進樣品管時,注意不要使上樣針彎曲或者頂在管子外側。
4、用力按BD C6流式細胞儀前方的電源鍵,啟動C6,在啟動期間,CFlow軟件的黃色燈會亮,同時C6的泵會開始運行。當打開電源時,C6會自動用鞘液沖洗液流管線。這一啟動過程持續大約5分鐘。
注意:當C6啟動時,不要打開儀器的蓋子,因為打開蓋子會干擾激光預熱的過程,并延長啟動時間。
5、當CFlow軟件的燈變綠,顯示CFlow已經連接并準備完畢(CFlowareconnectedandready),上過濾去離子水運行至少15分鐘,然后再進行樣本檢測。
6、對BD C6流式細胞儀進行質控檢測,請參閱CFlow用戶指南(CFlowUser’sGuide)了解使用C6提供的質控小球進行質控檢測操作的細節。
BD Accuri C6 Plus流式細胞儀的關閉操作:
1、在上樣針處放上裝有2ml過濾去離子水的管子,此時先不要在CFlow軟件中選擇任何空的樣品孔。
2、設定時間2分鐘。
3、點擊RUN按鍵。
4、在上樣針處放上裝有2ml去污液(Decontamination Solution,AccuriPart#KR-200)的管子。
5、選擇一個空的樣品孔。
6、設定時間2分鐘,設定流速為高速。
7、點擊RUN按鍵。
8、當運行結束,從上樣針移去清洗液管子。
9、放上裝有2ml過濾去離子水的管子,此時不要選擇任何空的樣品孔。
10、設定時間2分鐘。
11、點擊RUN按鍵。
12、當運行結束,將管子留在上樣針處。
13、按電源鍵,清洗液流循環會自動運行大約13分鐘,然后C6會自動關機。
14、在C6關機的過程中,儀器會自動運行液流循環,先后使用去污液和鞘液清洗管路和上樣針。
注意:不是必須在關閉流式細胞儀前退出CFlow軟件或關閉計算機。